以凱氏定氮法測定氮含量換算蛋白質(zhì)的方法, 是國際上通用的標(biāo)準(zhǔn)方法,操作簡單,測定結(jié)果重復(fù) 性和重現(xiàn)性都很好,廣泛用于各種食品、谷物、飼料 等樣品的蛋白質(zhì)含量測定。此法又分為常量、半微 量、微量法三種。其測定原理相同,主要區(qū)別在于常 量法的樣品及試劑用量較微量法多。而微量法則具 有實驗規(guī)模小,實驗費用低的優(yōu)點。但微量法的準(zhǔn) 確度和精密度比常量法要差一些。國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為 半微量凱氏定氮法。凱氏定氮法整個測定過程分為 消解、蒸餾、滴定三步[ 15] 。 要使測定結(jié)果有更好的正確度、準(zhǔn)確度和精準(zhǔn) 度,采用高效的方法和認(rèn)真細致掌握測定的每個步 驟、各個細節(jié)及相應(yīng)的注意事項,就顯得尤為重要。 本文就此進行深入的探討。 1　原理 蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。樣品與硫酸和催 化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解,分解生成的胺基 與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離, 用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù) 酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)含量。

1. 1　消化 有機物中的胺基在強熱和 Cu S O 4、濃 H 2SO 4作

用下,消化生成(NH 4) 2S O 4,反應(yīng)式為: 2NH2 +H 2S O 4 +2H+ =(NH 4 ) 2S O 4 (其 中 Cu S O 4 做催化劑) 

1. 2　蒸餾 在凱氏定氮器中與堿作用, 通過蒸餾釋放出 NH 3,收集于 H 3BO 3溶液中,反應(yīng)式為: (NH 4) 2S O 4 +2Na OH=2NH 3 +2H 2O+Na 2S O 4 2NH 3 +4H 3BO 3 =(NH 4) 2B 4O 7 + 5H 2O 

1. 3　滴定 用已知濃度的 H 2S O 4( 或 HCI ) 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定, 根據(jù) H 2SO 4( 或 HCI ) 消耗的量計算出氮的含量,然 后乘以相應(yīng)的換算因子,即得蛋白質(zhì)的含量,反應(yīng)式 為: (NH 4) 2B 4O 7 +H 2S O 4 +5H 2O=(NH 4) 2S O 4 + 4H 3BO 3 (NH 4 ) 2B 4O 7 +2HCl+5H 2O =2NH 4Cl+ 4H 3BO 3 實驗裝置圖見圖 1。 

依據(jù)凱氏定氮法,通過全自動凱氏定氮儀測定 樣品中氮或粗蛋白的方法已得到廣泛的認(rèn)可和使 用,以下是自動凱氏定氮儀測定魚粉和豆粕中粗蛋 白含量的實驗。