魷魚干選用新鮮魷魚經剖腹、去內臟和眼球、干燥、整形加工晾曬而成, 其產品新鮮或腐敗一般通過測定產品中揮發性鹽基氮(TVBN)的高低來判斷, 而我國現行的魷魚干標準中尚未規定 TVBN 的標準及檢測方法[ 1] 。 國標分析法[ 2] 對 TVBN 的測定是采用半微量定氮法或微量擴散法, 方法繁瑣費時。 我們在自動凱氏定氮儀測定蛋白質的基礎上, 摸索出一套自動蒸餾、吸收、滴定及計算的新方法。 方法簡便、快速、準確、可靠, 適用于大批量樣品的檢測 , 介紹如下:

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑 ① 2300 Kjeltec Auto Analy zer Unit , 瑞典福斯特卡托公司產品, 帶 750 ml 蒸餾管;② 氧化鎂及氧化鎂懸浮液(10 g/ L);③ 含溴甲酚綠和甲基紅指示劑的 1%硼酸吸收液:稱取 100 g 硼酸溶于 10 L 純水中, 添加 1 g/ L 的溴甲酚綠乙醇溶液 100 ml 和 1 g/ L 甲基紅乙醇溶液 70 ml ;④ 鹽酸標準溶液0.1 mol/ L。

1.2 測定方法

1.2.1 樣品處理 準確稱取剪碎的魷魚干 20 g 于錐形瓶中,加入 100 ml 純水, 振蕩器振搖 30 min 后過濾備測。

1.2.2 儀器操作條件 吸收液加入量 30 ml ;加水量 50 ml ;加堿量 0 ;模式 SafE;時間 2 s ;蒸餾體積;結果報告單位 mgN/100 g。

1.2.3 測定 準確吸取 10 ml 樣品濾液(視 TVBN 含量而定)于 750 ml 蒸餾管中, 加入10 ml 氧化鎂懸浮液, 迅速放進自動定氮儀蒸餾器上, 關上安全門, 儀器自動蒸餾、吸收、滴定、計算。同時添加同樣氧化鎂做空白實驗。

2 結果與討論

2.1 儀器操作參數條件的選擇 本方法的測定原理與半微量定氮法相同, 是利用堿性條件蒸出樣液中氨及胺類等揮發性堿性含氮物, 用標準酸溶液滴定。 考慮到樣品 TVBN 含量不同而選擇體積模式進行蒸餾滴定。 在樣液及氧化鎂加入量不變的前提下, 不同的加水量對測定結果的影響見表 1。 結果表明, 加水量的多少對檢測結果沒有明顯影響。 因實驗采用 750 ml 大蒸餾管, 測定時選擇加水量為 50 ml。 考慮到該儀器有自動計算功能, 結果報告單位直接選擇 mgN/ 100 g。

2.2 實驗操作的影響 實驗中發現, 樣液加入氧化鎂后應立即測定, 否則會使測定結果偏低, 且有隨著放置時間的延長結果更低的趨勢。 這可能是添加氧化鎂使樣液中的銨類物質轉化為氨而揮出。

2.3 加標回收實驗 TVBN 所測定的是動物食品中的蛋白質在腐敗過程中經分解所產生的氨及胺類等堿性含氮物, 所以本實驗將硫酸銨作為檢驗蒸餾器回收率的標準試劑進行加標回收實驗, 其回收率在 98.6%～ 101.2 %, 符合檢測要求(表 2)。

2.4 精密度實驗 取不同的魷魚干樣品, 分別平行測定 6 次,測定結果的相對標準偏差分別為 1.69%和 1.27%(表 3), 儀器測定方法的精密度滿足分析要求。

2.5 不同方法的對比 對同一樣品, 分別采用本方法與 GB/ T5009.44-1996 規定的半微量定氮法測定 TVBN 含量。 結果表明, 兩種方法對同一樣品的測定結果無顯著性差異(表 4)。

2.6 不同樣品預處理方法的比較 根據福斯特卡托公司提供的應用簡報[ 3]

, 將樣品粉碎后直接取 1 ～ 5 g 放入蒸餾管, 加入0.5 g 氧化鎂固體, 按前述儀器操作條件直接測定 TVBN 含量,結果見表 5 。 與表 3 結果相比, 直接測定的結果略低于提取物的測定值。 分析發現我們未采用應用報告中 1095 刀式磨粉碎樣品, 使樣品的粉碎程度和均勻性不夠。 因此, 直接法測定的前提是樣品充分粉碎均勻。

3 小結

采用自動定氮儀測定魷魚干中的揮發性鹽基氮, 精密度高、準確性好、回收率高。 只要樣品充分粉碎均勻可直接測定, 具有操作簡便、分析速度快、自動化程度高的特點, 測定 1 份樣品平均需 5 min , 適于大批量樣品的測定, 并可推廣到魚肉類揮發性鹽基氮的測定。